Metoder
vi arbejder med i H忙matologisk-Patologisk Forskningslaboratorium (HPF)
-
FLOWCYTOMETRI OG CELLESORTERING
Med FLOWCYTOMETRI unders酶ger vi, hvilke proteiner, der er til stede i den enkelte kr忙ftcelle eller i mikromilj酶et. Cellerne farves med fluorescensm忙rkede antistoffer, som binder til specifikke proteiner i cellen. Metoden giver desuden information om cellernes st酶rrelse og f忙notype. Vi sorterer udvalgte blod- og knoglemarvsceller i subpopulationer baseret p氓 deres overfladeproteiner. Sorteringen udf酶res enten ved at bruge beads-m忙rkede antistoffer til MAGNETISK oprensning med AUTOMACS PRO SEPARATOR eller ved at bruge fluorescensm忙rkede antistoffer til CELLESORTERING p氓 海角社区鈥檚 core-facilitet 鈥漈he Danish Center for Advanced Cell Analysis (DCCA)鈥, afh忙ngigt af projektets behov og de 酶nskede cellepopulationer.
-
SEKVENTERING
Vi anvender flere forskellige sekventeringsplatforme til vores projekter. Vi r氓der selv over en ILLUMINA MISEQ, som prim忙rt bruges til m氓lrettet sekventering af klonale immunglobulin-rearrangementer. Metoden anvendes til at p氓vise m氓lbar restsygdom hos patienter med eksempelvis myelomatose og lymfekr忙ft. Her kan vi identificere helt ned til 茅n kr忙ftcelle blandt en million normale B-celler. Derudover r氓der vi over en OXFORD NANOPORE MINION, som muligg酶r long-read-sekventering i mindre skala. Ved st酶rre sekventeringsprojekter (helgenom-, exom-, transkriptom- eller omfattende long-read-sekventering) f氓r vi udf酶rt selve sekventeringen eksternt.
-
BIOBANK
Vi nedfryser blod- og knoglemarvspr酶ver fra h忙matologiske patienter, der har givet samtykke til at indg氓 i vores projekter. Afh忙ngigt af form氓let isolerer vi relevante cellefraktioner samt blod- og marvplasma. Mononukleare celler oprenses ved negativ selektion p氓 AutoMACS鈥憇ystemet og nedfryses enten som levende celler eller som lyserede celler, der senere kan anvendes til oprensning af DNA og RNA. De levende celler opbevares i flydende kv忙lstof til efterf酶lgende analyser.
-
CELLEDYRKNING
Vi dyrker b氓de h忙matologiske cellelinjer og prim忙re blod- og knoglemarvsceller under kontrollerede laboratorieforhold. Cellelinjerne bruges som kontroller i molekyl忙rgenetiske analyser og til metodeudvikling, s氓 behovet for prim忙re celler reduceres, og de indg氓r endvidere i funktionelle studier. De prim忙re celler g酶r det muligt at unders酶ge patientn忙re biologiske processer i funktionelle assays og dermed opn氓 mere direkte indsigt i sygdomsbiologien.
